B因子溶血活性

补体激活的旁路途径(alteRNAtive pathway,AP)激活时,补体前段成分(C1,4,2)不活化。参与AP激活的除C3~C9外,尚有P、D、B等因子。

检查细节、注意事项、步骤、结果解读

B因子溶血活性——检查项目的不适宜人群:

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B因子溶血活性——检查项目的注意细节:

(1)血清中补体不稳定容易破坏,4℃仅能放置1d,0℃可放5d,-20℃可放置1个月。

(2)稀释液中Mg2+浓度过高过低都会影响AP-CH50活性。

(3)稀释液的pH:最适宜的pH为7.2~7.5,否则影响结果。

(4)不同个体的RE对测定结果有影响。

B因子溶血活性——检查项目的一般步骤:

B因子溶血活性的测定原理:未致敏的家兔红细胞(RE)(有类似酵母多糖或菊糖对人补体的作用)可在含Mg2+的EGTA缓冲液稀释的人血清中激活AP,引起溶血。溶血的程度可反映AP活性。

试剂:

(1)0.1mol/LEGTA:取NaOH3.5g,溶于蒸馏水85ml中,加入EGTA(乙二醇双乙胺醚四乙酸)19g使之溶解,补足蒸馏水至500ml。

(2)巴比妥缓冲原液:NaCl121.25g,巴比妥1.44g,巴比妥钠0.94g,蒸馏水补足500ml。

(3)稀释液:0.1mol/LEGTA80ml,巴比妥缓冲原液180ml,MgCl2·6H2O0.41g,蒸馏水补至1000ml,以1mol/LNaOH调pH至7.5。

(4)0.5%RE悬液:取保存于Alsever液的RE以生理盐水洗2次,稀释液洗1次后配成0.5%悬液(RE3×108/ml)。

(5)被测血清:被测血清分离后立即置-20℃保存,用前以稀释液1∶4稀释,37℃水浴10min。

(6)50%溶血标准管:取0.5%RE0.2ml,加入蒸馏水0.8ml。

操作方法:按表1加入各反应液。

B因子溶血活性——检查项目结果解读:

B因子溶血活性的测定原理:未致敏的家兔红细胞(RE)(有类似酵母多糖或菊糖对人补体的作用)可在含Mg2+的EGTA缓冲液稀释的人血清中激活AP,引起溶血。溶血的程度可反映AP活性。

试剂:

(1)0.1mol/LEGTA:取NaOH3.5g,溶于蒸馏水85ml中,加入EGTA(乙二醇双乙胺醚四乙酸)19g使之溶解,补足蒸馏水至500ml。

(2)巴比妥缓冲原液:NaCl121.25g,巴比妥1.44g,巴比妥钠0.94g,蒸馏水补足500ml。

(3)稀释液:0.1mol/LEGTA80ml,巴比妥缓冲原液180ml,MgCl2·6H2O0.41g,蒸馏水补至1000ml,以1mol/LNaOH调pH至7.5。

(4)0.5%RE悬液:取保存于Alsever液的RE以生理盐水洗2次,稀释液洗1次后配成0.5%悬液(RE3×108/ml)。

(5)被测血清:被测血清分离后立即置-20℃保存,用前以稀释液1∶4稀释,37℃水浴10min。

(6)50%溶血标准管:取0.5%RE0.2ml,加入蒸馏水0.8ml。

操作方法:按表1加入各反应液。

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